Plasmide CRISPR d'Activation (h) ULBP3: sc-403608-ACT

ULBP3 (UL16 binding protein 3) est un ligand induit par le stress, ancré à la membrane par un GPI, du récepteur activateur NKG2D (KLRK1) exprimé à la surface des cellules NK et de certains sous‑ensembles de lymphocytes T. En se liant à NKG2D, ULBP3 contribue à la surveillance immunitaire et à l’activation des lymphocytes cytotoxiques dans des contextes de stress cellulaire, de réponse aux dommages de l’ADN et de transformation maligne. Son expression est modulée par les signaux inflammatoires et les voies de réponse au stress, qui influencent la reconnaissance et l’élimination des cellules anormales indépendamment de l’antigène. Une dérégulation du contrôle de ULBP3 a été rapportée dans de nombreux types de cancers ainsi que dans des affections à médiation immunitaire, ce qui soutient son utilisation comme indicateur mécanistique de l’échappement immunitaire et des interactions tumeur–système immunitaire.

ULBP3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ULBP3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ULBP3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ULBP3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ULBP3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ULBP3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ULBP3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ULBP3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ULBP3 dans les cellules tumorales présentant une expression de ULBP3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.