ULBP2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403663-ACT

ULBP2 (UL16-binding protein 2) ist ein stressinduzierbarer, GPI-verankerter NKG2D-Ligand, der die Immunüberwachung fördert, indem er NKG2D auf NK-Zellen und zytotoxischen T-Lymphozyten bindet. Seine Expression wird durch zelluläre Stressprogramme wie DNA-Schadensantworten, onkogenes Signaling und entzündliche Stimuli moduliert und verknüpft ULBP2 damit mit Signalwegen, die die Immunogenität an der Zelloberfläche und die zytolytische Erkennung steuern. Eine dysregulierte ULBP2-Expression sowie das Shedding wurden bei mehreren Malignomen und im Kontext chronischer Entzündung und Infektion beschrieben, wo ULBP2 zur Immunflucht beitragen und die Aktivierungsschwellen von Immunzellen beeinflussen kann. Entsprechend wird ULBP2 breit als funktioneller Readout für zellulären Stress, Tumor–Immun-Interaktionen und Mechanismen untersucht, die die Signalübertragung der NKG2D-Achse regulieren.

ULBP2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ULBP2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ULBP2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ULBP2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ULBP2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ULBP2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ULBP2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ULBP2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ULBP2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ULBP2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.