Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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UKHC Double Nickase Plasmid (h): sc-402349-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das UKHC Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- UKHC Double-Nickase-Plasmid (h) und UKHC Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf KIF5B abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: UKHC: sc-133184
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
UKHC Double Nickase Plasmid (h) | sc-402349-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
UKHC Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402349-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KIF5B kodiert die ubiquitär exprimierte Kinesin-1-Schwerkette (UKHC), einen mikrotubuliabhängigen Motor, der den ATP-getriebenen anterograden Transport membranöser Fracht, von Organellen und Proteinkomplexen entlang von Axonen und anderen polarisierten Zelltypen antreibt. Über Interaktionen mit Kinesin-Leichtketten und Frachtadaptern koordiniert KIF5B den intrazellulären Transport, trägt zur Dynamik des mitotischen Spindelapparats bei und unterstützt die Aufrechterhaltung der Zellpolarität sowie die Organisation des Zytoskeletts. Diese Funktionen überschneiden sich mit Signalwegen, die den neuronalen Transport, die mitochondriale Verteilung und den Vesikelverkehr in sekretorischen und endozytotischen Systemen steuern. Eine veränderte Regulation oder Rearrangements von KIF5B wurden mit onkogenen Signalkontexten und gestörten Transportphänotypen in Verbindung gebracht, die für Tumorbiologie und Neurobiologie relevant sind.
UKHC Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des KIF5B-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von KIF5B abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die KIF5B-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit KIF5B-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.