UGT1A10 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402837-ACT

UGT1A10 kodiert eine humane UDP-Glucuronosyltransferase, die die Glucuronidierung verschiedenster endogener und xenobiotischer Substrate katalysiert und dadurch deren Löslichkeit erhöht, um die Detoxifikation und Elimination im Rahmen der Phase-II-Biotransformation zu unterstützen. Dieses Enzym trägt zur metabolischen Homöostase bei, indem es das Gleichgewicht zwischen lipophilen Verbindungen und ihren ausscheidbaren Glucuronid-Konjugaten reguliert und dabei mit intestinalen und hepatischen Netzwerken des Arzneistoffmetabolismus zusammenwirkt. Veränderungen in der Expression oder Aktivität von UGT1A10 können die Exposition gegenüber Nahrungsbestandteilen, Umweltchemikalien und Arzneimitteln verändern und so die Anfälligkeit für unerwünschte Arzneimittelreaktionen und chemischen Stress beeinflussen. Als Teil des UGT1A-Genclusters wird UGT1A10 häufig zusammen mit anderen UGT1A-Isoformen untersucht, um isoenzym-spezifische Substratselektion und Kompensationsmechanismen in Stoffwechselwegen aufzuklären.

UGT1A10 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen UGT1A10-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

UGT1A10 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des UGT1A10-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der UGT1A10-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen UGT1A10-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native UGT1A10-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von UGT1A10-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des UGT1A10-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem UGT1A10-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.