Partículas Lentivirales de Activación (h) UGT1A1: sc-401190-LAC

UGT1A1 codifica la UDP‑glucuronosiltransferasa 1A1, una enzima microsomal de desintoxicación de fase II que cataliza la glucuronidación de la bilirrubina y de diversos sustratos endógenos y xenobióticos en el retículo endoplásmico. Al convertir compuestos lipofílicos en glucurónidos más hidrosolubles, UGT1A1 favorece el aclaramiento hepático y se coordina con vías más amplias del metabolismo de fármacos, incluida la biotransformación ligada al citocromo P450 y el eflujo mediado por transportadores. La variación en la expresión o la actividad de UGT1A1 es un determinante clave de la homeostasis de la bilirrubina y de las diferencias interindividuales en el metabolismo de fármacos y sustancias químicas ambientales, con gran relevancia para la farmacogenómica y la investigación sobre función hepática. La desregulación de la capacidad de glucuronidación también se estudia en el contexto del estrés metabólico y de los mecanismos de enfermedad hepatobiliar.

Las partículas de activación lentiviral UGT1A1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de UGT1A1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral UGT1A1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción UGT1A1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de UGT1A1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo UGT1A1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.