Plasmide CRISPR/Cas9 KO Ufc1 (h): sc-409943

Présentation

UFC1 code l’enzyme de conjugaison de type E2 Ufc1, un composant central du système de conjugaison UFM1 (ubiquitin-fold modifier 1) qui assure l’ufmylation de protéines substrats. Cette voie coordonne la protéostasie au niveau du réticulum endoplasmique, la signalisation du stress du RE et des processus de contrôle qualité liés au fonctionnement de la voie sécrétoire, avec des rôles décrits dans le contrôle qualité associé aux ribosomes et dans l’homéostasie cellulaire. La perturbation des composants de l’ufmylation, dont UFC1, a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux, à des défauts hématopoïétiques et à l’adaptation au stress cellulaire liée au cancer dans des modèles expérimentaux, ce qui étaye sa pertinence pour la biologie des maladies. UFC1 est donc fréquemment étudié dans des contextes où la fonction du RE, la résistance au stress et le maintien du protéome influencent les décisions de destinée cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Ufc1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène UFC1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du UFC1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert UFC1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Ufc1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en UFC1 pour l'étude de la signalisation de Ufc1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de UFC1 essentiels à la fonction de Ufc1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de UFC1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Ufc1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Ufc1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus UFC1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Ufc1 plasmide HDR (h) et le Ufc1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie UFC1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles UFC1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.