Plasmide CRISPR/Cas9 KO UCP3 (h): sc-400866

Présentation

La protéine découplante 3 (UCP3) est un transporteur de la membrane interne mitochondriale principalement exprimé dans le muscle squelettique et impliqué dans la régulation de l’efficacité de la phosphorylation oxydative et des fuites de protons. En modulant le potentiel de membrane mitochondrial et la respiration, UCP3 influence l’oxydation des acides gras, l’équilibre rédox et le contrôle des espèces réactives de l’oxygène lors de fortes demandes métaboliques. L’activité d’UCP3 s’inscrit à l’interface de voies qui gouvernent l’homéostasie énergétique, la gestion des lipides et le contrôle qualité mitochondrial, y compris les réponses adaptatives à la disponibilité en nutriments et à l’exercice. Une expression ou une fonction altérée d’UCP3 a été associée à des phénotypes métaboliques liés à la sensibilité à l’insuline, à des traits associés à l’obésité et à une dysfonction mitochondriale dans des contextes cardiométaboliques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO UCP3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène UCP3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du UCP3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert UCP3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine UCP3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en UCP3 pour l'étude de la signalisation de UCP3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de UCP3 essentiels à la fonction de UCP3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de UCP3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le UCP3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le UCP3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus UCP3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le UCP3 plasmide HDR (h) et le UCP3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie UCP3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles UCP3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.