Plasmide Double Nickase (h) UCH-L1: sc-401088-NIC

UCHL1 code pour l’hydrolase C‑terminale de l’ubiquitine L1 (UCH‑L1), une enzyme de désubiquitination enrichie dans les neurones, qui maintient l’homéostasie de l’ubiquitine et influence le contrôle qualité des protéines via le système ubiquitine‑protéasome. En traitant des conjugués d’ubiquitine et en régulant le renouvellement de certains substrats, UCH‑L1 affecte la fonction synaptique, l’intégrité axonale et les réponses au stress cellulaire, avec des effets en aval sur les réseaux de protéostasie. Une dérégulation de l’expression ou de l’activité de UCHL1 a été associée à des phénotypes neurodégénératifs et à une résilience neuronale altérée, et UCH‑L1 est largement utilisée comme marqueur dans des études sur la différenciation neuronale et les lésions neuronales. Ces caractéristiques font de UCHL1 une cible pertinente pour disséquer les mécanismes couplant la désubiquitination, le maintien du protéome et la vulnérabilité neuronale.

UCH-L1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus UCHL1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de UCHL1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de UCHL1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de UCHL1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.