UBF Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400521

Panoramica

UBTF codifica il fattore di trascrizione a legame a monte (UBF), una proteina legante il DNA con domini HMG (high-mobility group) indispensabile per la trascrizione del DNA ribosomiale dipendente dalla RNA polimerasi I. UBF contribuisce all’organizzazione della cromatina dell’rDNA, favorisce la formazione del complesso di pre-inizio della Pol I e sostiene la struttura del nucleolo e la biogenesi dei ribosomi, collegandosi così al controllo della crescita cellulare e alla proteostasi. Attraverso il suo ruolo nella segnalazione dello stress nucleolare e il coordinamento con le vie del ciclo cellulare e della risposta al danno del DNA, un’alterata attività di UBTF/UBF può influenzare la proliferazione e la stabilità del genoma. La disregolazione della trascrizione della Pol I e della funzione nucleolare è una caratteristica ricorrente della biologia dei tumori ed è stata inoltre implicata in contesti di malattie del neurosviluppo e neurodegenerative.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO UBF (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene UBTF in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del UBTF insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto UBTF a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina UBF.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di UBTF per lo studio della segnalazione di UBF, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni UBTF critici per la funzione di UBF
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di UBTF per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal UBF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal UBF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus UBTF. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal UBF Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR UBF (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia UBTF per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio UBTF definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.