Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
UBF Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400521
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- UBF El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico UBF, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: UBF Anticuerpo (F-9): sc-13125
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
UBF Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-400521 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
UBTF codifica el factor de transcripción de unión aguas arriba (UBF), una proteína de unión al ADN con dominios tipo caja del grupo de alta movilidad (HMG) que es esencial para la transcripción del ADN ribosomal dependiente de la ARN polimerasa I. UBF ayuda a organizar la cromatina del rDNA, promueve la formación del complejo de preiniciación de la Pol I y sostiene la estructura nucleolar y la biogénesis de ribosomas, vinculándose así con el control del crecimiento celular y la proteostasis. A través de su papel en la señalización de estrés nucleolar y su coordinación con las vías del ciclo celular y de respuesta al daño del ADN, las alteraciones en la actividad de UBTF/UBF pueden influir en la proliferación y la estabilidad del genoma. La desregulación de la transcripción por Pol I y de la función nucleolar es una característica recurrente de la biología del cáncer y también se ha implicado en contextos de enfermedades del neurodesarrollo y neurodegenerativas.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO UBF (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen UBTF en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del UBTF junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de UBTF tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína UBF.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en UBTF para la investigación de la señalización de UBF, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de UBTF críticos para la función de UBF
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de UBTF para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido UBF CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido UBF CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus UBTF. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR UBF (h) y el plásmido HDR UBF (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología UBTF para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana UBTF definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.