Plasmide CRISPR/Cas9 KO UBAC2 (h): sc-407388

Présentation

UBAC2 (ubiquitin-associated domain containing 2) code une protéine associée au réticulum endoplasmique (RE), impliquée dans le contrôle qualité des protéines et la protéostasie dépendants de l’ubiquitine. Grâce à ses propriétés de liaison à l’ubiquitine et à sa localisation subcellulaire, UBAC2 a été associée à la régulation des réponses au stress du RE et à l’élimination des protéines mal repliées, en interaction avec des voies telles que la dégradation associée au RE (ERAD) et, plus largement, la signalisation ubiquitine–protéasome. Des études génétiques ont relié des loci d’UBAC2 à des phénotypes immunitaires, notamment à des signaux de susceptibilité rapportés dans des affections inflammatoires et auto-immunes, ce qui étaye sa pertinence en immunobiologie. Ces liens font d’UBAC2 une cible utile pour analyser comment la signalisation par l’ubiquitine module l’adaptation au stress et des états cellulaires associés à l’immunité.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO UBAC2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène UBAC2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du UBAC2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert UBAC2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine UBAC2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en UBAC2 pour l'étude de la signalisation de UBAC2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de UBAC2 essentiels à la fonction de UBAC2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de UBAC2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le UBAC2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le UBAC2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus UBAC2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le UBAC2 plasmide HDR (h) et le UBAC2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie UBAC2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles UBAC2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.