Plásmido CRISPR de Activación (h) U2AF35: sc-404986-ACT
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmdo de Activación CRISPR (h) U2AF35 es un sistema de activación de la trascripción mediante una activación sinérgica (SAM), diseñado para incrementar la expresión de un gen concreto
- Los Plásmdo de Activación CRISPR (h) U2AF35 incluyen los siguientes tres plásmidos, con un radio 1:1:1 : plásmido codificador de la nucleasa Cas 9 desactivada (dCas9), (D10A y N863A) fusionadas al dominio de transactivación VP64 y el gen de resistencia a blasticidina; plásmido codificador de la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 y el gen de resistencia a Higromicina; plásmido codificador de la secuencia diana específica de 20 nt de ARN y el gen de resistencia a puromicina.
- El complejo SAM resultante se une en un punto específico a unos 200 -250 nt aguas arriba del inicio de la transcripción del gen diana y ofrece un potente punto de reclutamiento de factores de transcripción para un eficiente incremento de la activación genica.
- Los gRNA codificados por el plásmido de activación CRISPR U2AF35 (h) y el plásmido de activación CRISPR U2AF35 (h2) se dirigen a regiones reguladoras distintas situadas aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción de U2AF1. Puede que haya uno o ambos diseños disponibles
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido CRISPR de Activación (h) U2AF35 | sc-404986-ACT | 20 µg | $397.00 |
El gen humano **U2AF1** codifica **U2AF35**, un componente central del factor auxiliar de empalme U2 que reconoce el sitio de empalme 3′ y ayuda a reclutar la snRNP U2 durante el ensamblaje del espliceosoma. Al asociarse con **U2AF2 (U2AF65)** e interactuar con los tramos polipirimidínicos y con características de las uniones de empalme, U2AF35 contribuye a decisiones de empalme alternativo que determinan la producción de isoformas de ARNm, la estabilidad de los transcritos y la diversidad proteica. Los programas de empalme dependientes de U2AF1 se entrecruzan con el procesamiento de ARN, el acoplamiento transcripcional y el control del ciclo celular, lo que lo convierte en un nodo clave de la regulación génica postranscripcional. Alteraciones recurrentes de U2AF1 y firmas de empalme desreguladas se asocian con la biología de las neoplasias hematológicas y con perturbaciones más amplias de la vía de empalme del ARN, lo que respalda su uso en estudios mecanísticos de la función del espliceosoma y de cambios de empalme relevantes para la enfermedad.
U2AF35 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de U2AF1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.
U2AF35 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus U2AF1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.
Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional U2AF1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de U2AF35. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo U2AF1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de U2AF35 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía U2AF35 en células tumorales con expresión de U2AF1 silenciada o reducida.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.