Plasmide CRISPR d'Activation (h) U1 SnRNP 70: sc-401829-ACT

SNRNP70 code U1 SnRNP 70, un composant central de la petite ribonucléoprotéine nucléaire U1 (U1 snRNP), qui reconnaît les sites d’épissage 5′ et initie l’assemblage du spliceosome lors de l’épissage des pré-ARNm. Grâce à ses interactions avec l’ARNsn U1 et d’autres facteurs du spliceosome, U1 SnRNP 70 favorise une définition précise des exons, le traitement co‑transcriptionnel de l’ARN et la régulation globale des programmes d’expression génique. La perturbation du fonctionnement du spliceosome et la modification du choix des sites d’épissage sont des caractéristiques récurrentes des réponses cellulaires au stress et du remodelage transcriptionnel oncogénique, ce qui fait de SNRNP70 un nœud pertinent pour étudier le contrôle du traitement de l’ARN. Des profils d’épissage aberrants liés à des perturbations du spliceosome sont également impliqués dans la neurodégénérescence et d’autres maladies où le métabolisme de l’ARN est altéré, ce qui motive des études mécanistiques des voies associées à U1.

U1 SnRNP 70 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SNRNP70 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

U1 SnRNP 70 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SNRNP70 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SNRNP70, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de U1 SnRNP 70. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SNRNP70 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de U1 SnRNP 70 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie U1 SnRNP 70 dans les cellules tumorales présentant une expression de SNRNP70 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.