Plasmide CRISPR d'Activation (h) Tyk 2: sc-400902-ACT

Le gène humain **TYK2** code la tyrosine kinase non réceptrice **Tyk2**, membre de la famille des kinases Janus, qui couple les récepteurs des interférons de type I et de type III ainsi que de multiples récepteurs d’interleukines à la phosphorylation des STAT en aval et aux programmes transcriptionnels associés. La signalisation dépendante de Tyk2 module les réponses immunitaires innées et adaptatives, en influençant la production de cytokines, la présentation de l’antigène et l’expression de gènes inflammatoires via la voie **JAK–STAT**. Des perturbations génétiques et fonctionnelles de **TYK2** sont associées à une dysrégulation immunitaire, pertinente pour la susceptibilité aux infections, des phénotypes inflammatoires chroniques et des états de signalisation liés à l’auto-immunité. En tant que nœud de voie, **TYK2** est largement étudié pour son rôle dans le dialogue entre récepteurs de cytokines et le contrôle dépendant du contexte des réseaux de gènes stimulés par les interférons.

Tyk 2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TYK2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Tyk 2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TYK2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TYK2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Tyk 2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TYK2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Tyk 2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Tyk 2 dans les cellules tumorales présentant une expression de TYK2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.