Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
TWIK-2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407263
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- TWIK-2 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico TWIK-2, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: TWIK-2 Anticuerpo (H-6): sc-376515
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
TWIK-2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-407263 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
KCNK6 codifica TWIK-2 (K2P6.1), un canal de potasio de dos poros que contribuye a la conductancia basal (de fuga) de K+ y ayuda a establecer el potencial de membrana en reposo y la excitabilidad de la membrana. La actividad de TWIK-2 influye en la homeostasis iónica y en la señalización dependiente de calcio al modular la polarización celular, y se le han atribuido funciones en el músculo liso vascular, la biología endotelial y la activación de células inmunitarias. Por su impacto en las propiedades eléctricas y en la señalización downstream, TWIK-2 se ha estudiado en vías relacionadas con la regulación del tono vascular y las respuestas inflamatorias. Por lo tanto, la disfunción de los canales K2P, incluido TWIK-2, es relevante para investigaciones mecanísticas sobre hipertensión, disfunción vascular y fisiopatología mediada por el sistema inmunitario.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO TWIK-2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen KCNK6 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del KCNK6 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de KCNK6 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TWIK-2.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en KCNK6 para la investigación de la señalización de TWIK-2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de KCNK6 críticos para la función de TWIK-2
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de KCNK6 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido TWIK-2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido TWIK-2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus KCNK6. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TWIK-2 (h) y el plásmido HDR TWIK-2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología KCNK6 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana KCNK6 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.