TWEAK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401202
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- TWEAK Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im TWEAK-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: TWEAK: sc-56248
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
TWEAK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) | sc-401202 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
TNFSF12 kodiert das Zytokin TWEAK (TNF-like weak inducer of apoptosis), ein Typ-II-Transmembranprotein, das auch als löslicher Ligand freigesetzt werden kann und vorwiegend über den Rezeptor FN14/TNFRSF12A signalisiert. Die Bindung von TWEAK an FN14 moduliert die Aktivität der NF-κB- und MAPK-Signalwege und beeinflusst dadurch Zellüberleben, Proliferation, Migration, Differenzierung sowie die Expression entzündungsbezogener Gene – mit kontextabhängigen Effekten auf Apoptose und Gewebeumbau. Diese Achse ist an der Regulation angiogener und fibrotischer Programme beteiligt, ebenso an der Rekrutierung von Immunzellen und an Zytokin-Netzwerken in geschädigtem oder gestresstem Gewebe. Eine fehlregulierte TWEAK/FN14-Signalgebung wurde mit entzündlichen und autoimmunen Krankheitsmechanismen, neuroinflammatorischen Prozessen sowie dem Umbau der Tumormikroumgebung in Verbindung gebracht und stützt damit mechanistische Studien in Immunologie und Krebsbiologie.
Das TWEAK CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TNFSF12-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TNFSF12-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TNFSF12 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TWEAK-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TNFSF12-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TWEAK-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf TNFSF12-Exone abzielen, die für die TWEAK-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere TNFSF12-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom TWEAK CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom TWEAK CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TNFSF12-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TWEAK HDR-Plasmid (h) und TWEAK HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TNFSF12-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TNFSF12-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.