Tuba Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406569

Descripción general

DNMBP codifica Tuba, un factor de intercambio de nucleótidos de guanina (GEF) de Rho multidominio que conecta la señalización de membrana con la remodelación del citoesqueleto de actina y microtúbulos. Mediante la activación de pequeñas GTPasas como CDC42 y la coordinación con complejos endocíticos y de uniones celulares, Tuba ayuda a regular la polaridad celular, el tráfico vesicular y la remodelación de las uniones adherentes y estrechas. Estas funciones sitúan a DNMBP dentro de vías que controlan la organización epitelial, el crecimiento de neuritas y la morfogénesis dependiente de la migración. La desregulación de la señalización del citoesqueleto y de las redes de polaridad en las que participa Tuba se ha implicado en contextos de invasión celular aberrante y fenotipos del neurodesarrollo, lo que respalda su valor en estudios mecanísticos de la arquitectura celular relevante para enfermedades.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Tuba (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DNMBP en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DNMBP junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DNMBP tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Tuba.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DNMBP para la investigación de la señalización de Tuba, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de DNMBP críticos para la función de Tuba
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DNMBP para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Tuba CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Tuba CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DNMBP. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Tuba (h) y el plásmido HDR Tuba (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DNMBP para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DNMBP definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.