Plásmido CRISPR de Activación (h) TTBK1: sc-403998-ACT

TTBK1 (tau tubulin kinase 1) es una quinasa de serina/treonina enriquecida en neuronas, implicada en la regulación de la dinámica del citoesqueleto mediante la fosforilación de proteínas asociadas a microtúbulos, incluida tau, y la modulación del crecimiento de neuritas. Se vincula a vías que controlan la estabilidad de los microtúbulos, el transporte axonal y la proteostasis, con conexiones funcionales con eventos de señalización dependientes de la fosforilación que influyen en la polaridad neuronal y el mantenimiento sináptico. La actividad alterada de TTBK1 se ha estudiado en el contexto de la biología de las enfermedades neurodegenerativas, donde la fosforilación desregulada de tau y la remodelación del citoesqueleto son características moleculares clave. En modelos celulares humanos, la perturbación de la expresión de TTBK1 ayuda a investigar los efectos en red impulsados por quinasas sobre las respuestas al estrés neuronal y la organización del citoesqueleto.

TTBK1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TTBK1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TTBK1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TTBK1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TTBK1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TTBK1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TTBK1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TTBK1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TTBK1 en células tumorales con expresión de TTBK1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.