TSSC3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423530

Panoramica

Phlda2 codifica la proteina “pleckstrin homology-like domain family A member 2”, nota anche come TSSC3, un fattore imprintato che regola la crescita ed è implicato nel controllo dello sviluppo placentare e della crescita fetale nel topo. TSSC3 è associata a processi di segnalazione che influenzano la proliferazione e la sopravvivenza cellulare, inclusi pathway che integrano segnali dipendenti dai fosfoinositidi e la regolazione dell’espressione genica in risposta allo stress. Un dosaggio alterato o un imprinting deregolato al locus Phlda2 è stato associato a fenotipi dello sviluppo ed è rilevante per studi sul controllo della crescita e su funzioni di tipo oncosoppressore in specifici contesti cellulari. In quanto gene espresso dalla madre, Phlda2 è anche un modello utile per indagare gli effetti legati all’origine parentale, la regolazione epigenetica e le reti trascrizionali sensibili al dosaggio.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TSSC3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Phlda2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Phlda2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Phlda2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TSSC3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Phlda2 per lo studio della segnalazione di TSSC3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Phlda2 critici per la funzione di TSSC3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Phlda2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TSSC3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TSSC3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Phlda2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TSSC3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TSSC3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Phlda2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Phlda2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.