TSSC3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423530

Descripción general

Phlda2 codifica la proteína miembro 2 de la familia con dominio tipo pleckstrina homology A, también conocida como TSSC3, un factor improntado y regulador del crecimiento implicado en el control del desarrollo placentario y del crecimiento fetal en el ratón. TSSC3 se asocia a procesos de señalización que influyen en la proliferación y la supervivencia celulares, incluidas vías que integran señales dependientes de fosfoinosítidos y la regulación de la expresión génica en respuesta al estrés. La alteración de la dosis o una impronta desregulada en el locus Phlda2 se ha relacionado con fenotipos del desarrollo y es relevante para estudios sobre el control del crecimiento y funciones de tipo supresor tumoral en contextos celulares específicos. Como gen de expresión materna, Phlda2 también es un modelo útil para investigar efectos dependientes del progenitor de origen, regulación epigenética y redes transcripcionales sensibles a la dosis.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TSSC3 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Phlda2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Phlda2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Phlda2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TSSC3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Phlda2 para la investigación de la señalización de TSSC3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Phlda2 críticos para la función de TSSC3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Phlda2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TSSC3 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido TSSC3 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Phlda2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TSSC3 (m) y el plásmido HDR TSSC3 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Phlda2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Phlda2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.