TSPYL5 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403934-ACT

TSPYL5 (testisspezifisches Protein, Y-kodiert‑ähnlich 5) ist ein Mitglied der Familie der Nukleosomen-Assemblierungsproteine und fungiert als chromatinassoziierter Regulator der Transkription und von Zellschicksalsentscheidungen. Es wurde mit der Modulation der Signalstärke des p53‑Signalwegs in Verbindung gebracht, indem es die p53‑Stabilität und transkriptionelle Programme beeinflusst und dadurch die Zellzykluskontrolle, Seneszenz sowie apoptotische Stressantworten mitsteuert. Eine veränderte TSPYL5‑Expression wurde in mehreren Tumorkontexten beschrieben, was mit Rollen in der epigenetischen Regulation und in onkogenen Signalnetzwerken vereinbar ist. Diese Eigenschaften machen TSPYL5 zu einem nützlichen Ziel für die Untersuchung chromatinabhängiger Genregulation, von Stressantwort‑Schaltkreisen und krebsrelevanter transkriptioneller Zustände in humanen Zellen.

TSPYL5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TSPYL5-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TSPYL5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TSPYL5-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TSPYL5-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TSPYL5-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TSPYL5-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TSPYL5-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TSPYL5-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TSPYL5-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.