Plásmido CRISPR de Activación (m) TSHZ1: sc-431049-ACT

Tshz1 codifica el factor de transcripción homeobox con dedos de zinc TSHZ1, un regulador nuclear de programas génicos del desarrollo que determinan el patrón tisular y las decisiones de destino celular en el ratón. TSHZ1 integra el control transcripcional en procesos asociados a la morfogénesis, incluidos la diferenciación, la organogénesis y el mantenimiento de la identidad específica de linaje mediante una regulación de promotores y potenciadores dependiente del contexto. La actividad desregulada de TSHZ1 se ha implicado en fenotipos congénitos y del neurodesarrollo en estudios genéticos, lo que lo convierte en un nodo útil para analizar redes transcripcionales que acoplan la señalización del desarrollo con la diferenciación terminal. La modulación de la expresión de Tshz1 sustenta trabajos mecanísticos sobre circuitos de regulación génica en modelos embrionarios y derivados de células madre, así como el mapeo de vías en sistemas en los que los factores homeobox coordinan estados de cromatina y transcripción.

TSHZ1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Tshz1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TSHZ1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Tshz1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Tshz1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TSHZ1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Tshz1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TSHZ1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TSHZ1 en células tumorales con expresión de Tshz1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.