Plasmide CRISPR/Cas9 KO TSG-6 (m): sc-423437

Présentation

Tnfaip6 code la protéine 6 induite par le facteur de nécrose tumorale α (TSG‑6), une protéine sécrétée se liant à l’hyaluronane, qui remodèle la matrice extracellulaire lors de l’inflammation et des lésions tissulaires. TSG‑6 catalyse le transfert de chaînes lourdes de l’inter‑α‑inhibiteur vers l’hyaluronane, favorisant la formation de matrices stables riches en HA, qui influencent l’adhérence des leucocytes, la migration cellulaire et la résolution des réponses inflammatoires. Dans les systèmes murins, TNFAIP6 est rapidement induit en aval de signaux pro‑inflammatoires tels que TNF/NF‑κB et module l’activité des chimiokines, les réseaux de protéases et l’organisation de la matrice. Une biologie TSG‑6/HA dérégulée a été associée à des modèles d’arthrite, d’inflammation pulmonaire et intestinale, de réparation des plaies et de fibrose, soutenant son utilisation comme nœud mécanistique reliant la signalisation des cytokines à la dynamique de la MEC.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TSG-6 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tnfaip6 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tnfaip6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tnfaip6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TSG-6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tnfaip6 pour l'étude de la signalisation de TSG-6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Tnfaip6 essentiels à la fonction de TSG-6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tnfaip6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TSG-6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TSG-6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tnfaip6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TSG-6 plasmide HDR (m) et le TSG-6 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tnfaip6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tnfaip6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.