TS Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423565

Descripción general

Tyms codifica la timidilato sintasa (TS), una enzima clave dependiente del folato que cataliza la conversión de dUMP a dTMP, manteniendo las reservas de nucleótidos de timidina necesarias para la replicación y la reparación del ADN. La actividad de TS vincula el metabolismo de un carbono con la progresión de la fase S, la estabilidad del genoma y la síntesis de ADN mitocondrial y nuclear a través de la red de biosíntesis de novo de pirimidinas. En sistemas murinos, la regulación de Tyms y la abundancia de TS se estudian comúnmente en tejidos proliferativos y modelos celulares de ciclo rápido, donde un desequilibrio de nucleótidos puede desencadenar estrés replicativo y señalización de daño en el ADN. Un flujo metabólico desregulado asociado a TS es relevante para mecanismos de alteración del control del ciclo celular e inestabilidad genómica, que se investigan con frecuencia en biología del cáncer y en estudios de la vía del folato.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TS (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Tyms en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Tyms junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Tyms tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TS.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Tyms para la investigación de la señalización de TS, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Tyms críticos para la función de TS
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Tyms para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TS CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido TS CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Tyms. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TS (m) y el plásmido HDR TS (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Tyms para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Tyms definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.