Trypsin-3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423520

Panoramica

Prss3 codifica la tripsina-3, una proteasi serinica secreta che catalizza la scissione proteolitica dopo residui di lisina o arginina e contribuisce al turnover delle proteine extracellulari. Nei tessuti murini, l’attività della tripsina-3 può influenzare il rimodellamento pericellulare processando componenti della segnalazione dei recettori attivati da proteasi (PAR) e interagendo con inibitori endogeni come gli inibitori delle proteasi seriniche, modulando risposte infiammatorie e legate alla barriera. Una proteolisi deregolata della famiglia delle tripsine è stata associata ad anomalie della dinamica epiteliale, a vie correlate alla pancreatite e al rimodellamento del microambiente tumorale tramite alterazioni dell’adesione cellulare e del processamento della matrice. Di conseguenza, Prss3 viene studiato per il suo ruolo nelle reti di proteasi che regolano la secrezione, l’omeostasi tissutale e le cascate di segnalazione guidate da proteasi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Trypsin-3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Prss3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Prss3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Prss3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Trypsin-3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Prss3 per lo studio della segnalazione di Trypsin-3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Prss3 critici per la funzione di Trypsin-3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Prss3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Trypsin-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Trypsin-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Prss3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Trypsin-3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Trypsin-3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Prss3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Prss3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.