Trypsin-3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423520

Descripción general

Prss3 codifica la tripsina-3, una proteasa serina secretada que cataliza el corte proteolítico después de residuos de lisina o arginina y contribuye al recambio de proteínas extracelulares. En tejidos de ratón, la actividad de la tripsina-3 puede influir en la remodelación pericelular al procesar componentes de la señalización de los receptores activados por proteasas (PAR) e interactuar con inhibidores endógenos como los inhibidores de proteasas serinas, modulando respuestas inflamatorias y relacionadas con la función de barrera. La proteólisis desregulada de la familia de las tripsinas se ha asociado con dinámicas epiteliales aberrantes, vías vinculadas a la pancreatitis y la remodelación del microambiente tumoral mediante cambios en la adhesión celular y el procesamiento de la matriz. En consecuencia, Prss3 se estudia por sus funciones en redes de proteasas que regulan la secreción, la homeostasis tisular y cascadas de señalización impulsadas por proteasas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Trypsin-3 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Prss3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Prss3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Prss3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Trypsin-3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Prss3 para la investigación de la señalización de Trypsin-3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Prss3 críticos para la función de Trypsin-3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Prss3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Trypsin-3 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Trypsin-3 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Prss3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Trypsin-3 (m) y el plásmido HDR Trypsin-3 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Prss3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Prss3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.