Trypsin-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401128

Übersicht

PRSS1 kodiert Trypsin-1, eine sezernierte Serinprotease, die als Trypsinogen synthetisiert und im Gastrointestinaltrakt aktiviert wird, um Peptidsubstrate zu spalten und proteolytische Kaskaden einzuleiten. Seine Aktivität trägt zur Aktivierung von Verdauungsenzymen bei und kann die extrazelluläre Proteolyse modulieren, mit nachgelagerten Effekten auf die Funktion der epithelialen Barriere und die inflammatorische Signalübertragung. Eine fehlregulierte Trypsin-1-Aktivierung und PRSS1-Varianten stehen mit der Biologie der Pankreatitis in Verbindung, einschließlich vorzeitiger Zymogenaktivierung, Stressantworten von Azinuszellen und Mechanismen der Gewebeschädigung. PRSS1 ist daher ein nützlicher Ausgangspunkt, um proteasegetriebene Signalwege und Genotyp-Phänotyp-Beziehungen in pankreatischen und gastrointestinalen Forschungsmodellen zu untersuchen.

Das Trypsin-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PRSS1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PRSS1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PRSS1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Trypsin-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PRSS1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Trypsin-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PRSS1-Exone abzielen, die für die Trypsin-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PRSS1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Trypsin-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Trypsin-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PRSS1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Trypsin-1 HDR-Plasmid (h) und Trypsin-1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PRSS1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PRSS1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.