Plasmide CRISPR/Cas9 KO Trypsin-1 (h): sc-401128

Présentation

PRSS1 code la trypsine-1, une protéase à sérine sécrétée, synthétisée sous forme de trypsinogène puis activée dans le tractus gastro-intestinal afin de cliver des substrats peptidiques et d’initier des cascades protéolytiques. Son activité contribue à l’activation des enzymes digestives et peut moduler la protéolyse extracellulaire, avec des effets en aval sur la fonction de barrière épithéliale et la signalisation inflammatoire. Une activation dérégulée de la trypsine-1 et des variants de PRSS1 sont associés à la biologie de la pancréatite, notamment via l’activation prématurée des zymogènes, les réponses au stress des cellules acinaires et les mécanismes de lésions tissulaires. PRSS1 constitue donc un point d’entrée utile pour étudier les voies dépendantes des protéases et les relations génotype‑phénotype dans des modèles de recherche pancréatiques et gastro-intestinaux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Trypsin-1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PRSS1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PRSS1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PRSS1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Trypsin-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PRSS1 pour l'étude de la signalisation de Trypsin-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PRSS1 essentiels à la fonction de Trypsin-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PRSS1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Trypsin-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Trypsin-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PRSS1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Trypsin-1 plasmide HDR (h) et le Trypsin-1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PRSS1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PRSS1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.