TRPV3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-417690-ACT

TRPV3 kodiert einen wärme- und chemikaliensensitiven, nichtselektiven Kationenkanal aus der TRP-Vanilloid-Familie, der den Ca2+-Einstrom in epithelialen und sensorischen Kontexten reguliert. Die Aktivierung des Kanals beeinflusst die Membranerregbarkeit sowie nachgeschaltete Ca2+-abhängige Signalwege, die an der Keratinozytendifferenzierung, der Barrierehomöostase und der neuroepithelialen Kommunikation beteiligt sind. Die TRPV3-Aktivität greift in inflammatorische und prurizeptive Signalnetzwerke ein, indem sie die intrazelluläre Calciumdynamik und Second-Messenger-Kaskaden moduliert. Eine veränderte TRPV3-Expression oder -Funktion wurde mit Phänotypen der Hautbarrierestörung und der Biologie chronischen Juckreizes in Verbindung gebracht, was TRPV3 als mechanistisches Ziel in der Forschung zu epidermalen und sensorischen Signalwegen stützt.

TRPV3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TRPV3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TRPV3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TRPV3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TRPV3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TRPV3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TRPV3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TRPV3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TRPV3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TRPV3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.