Plasmide CRISPR d'Activation (h) TRPV3: sc-417690-ACT

TRPV3 code un canal cationique non sélectif sensible à la chaleur et à des agents chimiques, appartenant à la famille des récepteurs transitoires potentiels de type vanilloïde, et régule l’influx de Ca2+ dans des contextes épithéliaux et sensoriels. L’activation du canal influence l’excitabilité membranaire et les voies de signalisation en aval dépendantes du Ca2+, impliquées dans la différenciation des kératinocytes, l’homéostasie de la barrière cutanée et la communication neuro-épithéliale. L’activité de TRPV3 s’inscrit également dans des réseaux de signalisation inflammatoires et pruritogènes via la modulation de la dynamique du calcium intracellulaire et de cascades de seconds messagers. Une expression ou une fonction altérée de TRPV3 a été associée à des phénotypes de dysfonction de la barrière cutanée et à la biologie du prurit chronique, ce qui soutient son utilisation comme cible mécanistique dans la recherche sur les voies épidermiques et sensorielles.

TRPV3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TRPV3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TRPV3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TRPV3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TRPV3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TRPV3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TRPV3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TRPV3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TRPV3 dans les cellules tumorales présentant une expression de TRPV3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.