Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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TrpRS Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423692
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- TrpRS El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico TrpRS, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: TrpRS Anticuerpo (C-7): sc-374401
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
TrpRS Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423692 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Wars codifica la triptofanil-ARNt sintetasa (TrpRS), una aminoacil-ARNt sintetasa citosólica que une L-triptófano a su ARNtTrp correspondiente, aportando el ARNt cargado necesario para una traducción precisa del ARNm. Al controlar la carga de ARNt y favorecer la elongación ribosomal, TrpRS ayuda a acoplar la disponibilidad de nutrientes a la síntesis de proteínas y a los programas celulares de adaptación al estrés. La alteración de la actividad de las aminoacil-ARNt sintetasas puede afectar la proteostasis, la señalización integrada de estrés y la fidelidad de la traducción, procesos implicados con frecuencia en la inflamación, la neurodegeneración y la transformación oncogénica. Por ello, Wars en ratón constituye un nodo útil para estudiar cómo una capacidad de traducción alterada remodela el estado celular y fenotipos relevantes para la enfermedad in vitro e in vivo.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO TrpRS (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Wars en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Wars junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Wars tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TrpRS.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Wars para la investigación de la señalización de TrpRS, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Wars críticos para la función de TrpRS
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Wars para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido TrpRS CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido TrpRS CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Wars. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TrpRS (m) y el plásmido HDR TrpRS (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Wars para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Wars definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.