TRPM5 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403223

Descripción general

TRPM5 (miembro 5 de la subfamilia M de los canales catiónicos de potencial receptor transitorio) es un canal de cationes monovalentes activado por Ca2+ que despolariza la membrana plasmática en respuesta a señales de calcio intracelular. Funciona aguas abajo de la señalización de la fosfolipasa C y de la liberación de Ca2+ mediada por IP3, modulando la actividad eléctrica evocada por estímulos y la amplificación de la señal en tipos celulares quimiosensoriales y secretores. La actividad de TRPM5 está vinculada a vías impulsadas por GPCR implicadas en la transducción del gusto y en otras respuestas celulares dependientes del calcio, influyendo en la excitabilidad y en programas transcripcionales posteriores. La expresión o función desregulada de TRPM5 se ha asociado con una señalización sensorial alterada y se ha investigado en el contexto del comportamiento de células cancerosas y de fenotipos de señalización metabólica.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TRPM5 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TRPM5 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TRPM5 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TRPM5 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TRPM5.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TRPM5 para la investigación de la señalización de TRPM5, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de TRPM5 críticos para la función de TRPM5
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TRPM5 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TRPM5 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido TRPM5 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TRPM5. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TRPM5 (h) y el plásmido HDR TRPM5 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TRPM5 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TRPM5 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.