TRPC6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401205

概要

TRPC6は、トランジェント受容体電位（TRP）カノニカル（canonical）ファミリーに属する非選択性カチオンチャネルをコードしており、細胞膜における受容体作動性のCa²⁺流入を媒介します。チャネル活性は一般に、GPCRや受容体型チロシンキナーゼの下流で作動するPLC依存性シグナル伝達と連動しており、転写応答、細胞骨格の再編成、細胞運動性を制御する細胞質Ca²⁺ダイナミクスを形成します。ヒト組織では、TRPC6は機械刺激感受性およびジアシルグリセロール応答性のカルシウム流入に寄与し、カルシニューリン–NFATやMAPKシグナル伝達などの経路を下流で活性化します。TRPC6機能の破綻は、腎臓のポドサイト生物学や糸球体疾患の分子機構に加え、心血管系および神経炎症過程にも関与するとされており、細胞ベースモデルにおける経路解析の標的としての有用性が支持されています。

TRPC6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTRPC6遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TRPC6内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TRPC6のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TRPC6タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TRPC6シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TRPC6欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TRPC6の機能に不可欠なTRPC6エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TRPC6ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TRPC6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTRPC6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TRPC6遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TRPC6 HDRプラスミド（h）および TRPC6 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTRPC6ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTRPC6標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。