TRP1 Plasmide Double Nickase (m): sc-423569-NIC

Il gene murino **Tyrp1** codifica la proteina 1 correlata alla tirosinasi (**TRP1**), una glicoproteina di membrana dei melanosomi necessaria per una melanogenesi normale e per la produzione del pigmento eumelanina. TRP1 agisce nella via biosintetica melanina–metabolismo della tirosina e supporta la maturazione dei melanosomi e l’equilibrio redox all’interno dei granuli pigmentari. Alterazioni dell’attività di Tyrp1 compromettono quantità e qualità della melanina, contribuendo a fenotipi di pigmentazione che in vivo modellano alcuni aspetti dei disturbi della pigmentazione oculocutanea. Nei melanociti e nelle cellule derivate da melanoma, Tyrp1 è spesso utilizzato come marcatore associato alla linea cellulare per studiare lo stato di differenziamento, la biogenesi dei melanosomi e le risposte allo stress legate al pigmento.

TRP1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Tyrp1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Tyrp1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Tyrp1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Tyrp1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.