Plásmido CRISPR de Activación (h) Troponin T-FS: sc-402885-ACT

TNNT3 codifica la troponina T del músculo esquelético de contracción rápida (Troponina T-FS), un componente central del complejo de troponina que ancla la tropomiosina al filamento fino y acopla la unión de Ca²⁺ al ciclo regulado de puentes cruzados actina–miosina. Al integrar la señalización del calcio con la mecánica del sarcómero, la Troponina T-FS contribuye a determinar la cinética de contracción, la generación de fuerza y las propiedades contráctiles específicas del tipo de fibra. La actividad de TNNT3 se entrecruza con las vías de acoplamiento excitación–contracción y de ensamblaje miofibrilar que configuran el rendimiento muscular y la integridad estructural. La desregulación o las variaciones en componentes de la troponina rápida se han asociado con una contractilidad alterada y fenotipos miopáticos, lo que convierte a TNNT3 en un nodo útil para estudiar la biología del músculo esquelético y la remodelación contráctil relevante para enfermedades.

Troponin T-FS El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TNNT3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Troponin T-FS El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TNNT3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TNNT3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Troponin T-FS. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TNNT3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Troponin T-FS en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Troponin T-FS en células tumorales con expresión de TNNT3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.