Plásmido CRISPR de Activación (h) Troponin I-SS: sc-403502-ACT

TNNI1 codifica la troponina I-SS, una isoforma de troponina I del músculo estriado que funciona como la subunidad inhibidora del complejo de troponina, regulando la interacción actina–miosina de manera dependiente de Ca2+. Al modular la activación de los filamentos finos y la contractilidad del sarcómero, la troponina I-SS contribuye al acoplamiento excitación–contracción y al rendimiento de las fibras musculares durante el desarrollo y en contextos musculares especializados. La expresión de TNNI1 y el equilibrio entre isoformas se cruzan con vías que controlan la miofibrilogénesis, la señalización del calcio y la remodelación del aparato contráctil. Los cambios en la composición de la troponina y la regulación sarcomérica descontrolada son relevantes para estudios de miopatías y fenotipos relacionados con cardiomiopatías, así como para sistemas modelo que examinan la diferenciación muscular y las respuestas al estrés.

Troponin I-SS El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TNNI1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Troponin I-SS El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TNNI1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TNNI1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Troponin I-SS. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TNNI1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Troponin I-SS en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Troponin I-SS en células tumorales con expresión de TNNI1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.