Troponin C fast skeletal CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423432

Übersicht

Tnnc2 kodiert Troponin C der schnellen Skelettmuskulatur, eine Ca2+-bindende regulatorische Untereinheit des Troponin-Komplexes, der die Aktivierung der dünnen Filamente und den Querbrückenzyklus in schnell zuckender Skelettmuskulatur steuert. Durch das Erfassen zytosolischer Ca2+-Transienten koordiniert TNNC2 die Bewegung von Tropomyosin auf Aktin, um die Aktomyosin-ATPase-Aktivität und die Kontraktionskraft während der Erregungs-Kontraktions-Kopplung zu modulieren. Dieses Protein ist in Signalwege der Calcium-Handhabung und der Sarkomerorganisation eingebunden und verbindet die Dynamik intrazellulärer Signalgebung mit der mechanischen Leistung in Muskelfasern. Veränderte Funktion des Troponin-Komplexes und eine veränderte Ca2+-Empfindlichkeit sind relevant für Studien zur Leistungsfähigkeit der Skelettmuskulatur, zur Physiologie von Muskelfasertypen und zu Mechanismen, die zu Phänotypen von Muskelschwäche beitragen.

Das Troponin C fast skeletal CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Tnnc2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Tnnc2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Tnnc2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Troponin C fast skeletal-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Tnnc2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Troponin C fast skeletal-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Tnnc2-Exone abzielen, die für die Troponin C fast skeletal-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Tnnc2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Troponin C fast skeletal CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Troponin C fast skeletal CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Tnnc2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Troponin C fast skeletal HDR-Plasmid (m) und Troponin C fast skeletal HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Tnnc2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Tnnc2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.