Tropomyosin α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423481
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Tropomyosin α Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im Tropomyosin α-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Tropomyosin α: sc-376541
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Tropomyosin α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-423481 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Das Mausgen **Tpm1** kodiert Tropomyosin α, ein aktinbindendes Coiled-Coil-Protein, das filamentöses Aktin stabilisiert und die Aktomyosin-Funktion festlegt, indem es den Zugang von Myosin zu Aktin reguliert. Tropomyosin α trägt zur Zytoskelettarchitektur, zur Bildung von Stressfasern und zu kontraktilen Dynamiken bei, die Zelladhäsion, Migration und Mechanotransduktion prägen. Über seine Rolle in der Organisation von Aktinfilamenten ist **TPM1** mit Signalwegen verknüpft, die das Remodelling sarkomerischer und nichtmuskel-spezifischer Aktinstrukturen steuern, einschließlich der Rho-GTPase-abhängigen Regulation des Zytoskeletts. Eine veränderte Balance von Tropomyosin-Isoformen und eine TPM1-abhängige Aktinregulation wurden mit Störungen der Muskelfunktion sowie mit einer breiteren zytoskelettalen Dysregulation in Verbindung gebracht, die in Modellen der Kardiomyopathie und der Tumorzellmotilität relevant ist.
Das Tropomyosin α CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Tpm1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Tpm1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Tpm1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Tropomyosin α-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Tpm1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Tropomyosin α-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Tpm1-Exone abzielen, die für die Tropomyosin α-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Tpm1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom Tropomyosin α CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Tropomyosin α CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Tpm1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Tropomyosin α HDR-Plasmid (m) und Tropomyosin α HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Tpm1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Tpm1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.