TrkB Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421983

Panoramica

Ntrk2 codifica per il recettore tirosin-chinasico TrkB, un recettore ad alta affinità per BDNF e NT-4/5 che regola la sopravvivenza neuronale, la differenziazione e la plasticità sinaptica. Dopo il legame con il ligando, TrkB attiva le cascate di segnalazione canoniche PI3K–AKT, MAPK/ERK e PLCγ–Ca²⁺, che collegano gli stimoli extracellulari delle neurotrofine a programmi trascrizionali e citoscheletrici. La segnalazione dipendente da TrkB influenza la crescita dei neuriti, il rimodellamento delle spine dendritiche e la messa a punto dei circuiti dipendente dall’attività nel sistema nervoso in sviluppo e in quello adulto. Alterazioni dell’attività della via Ntrk2/TrkB sono state associate a fenotipi neuroevolutivi e neuropsichiatrici, nonché a processi neurodegenerativi, a sostegno della sua ampia rilevanza nei modelli di malattia incentrati sui meccanismi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TrkB (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ntrk2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ntrk2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ntrk2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TrkB.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ntrk2 per lo studio della segnalazione di TrkB, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ntrk2 critici per la funzione di TrkB
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ntrk2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TrkB CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TrkB CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ntrk2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TrkB Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TrkB (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ntrk2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ntrk2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.