Trk C Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400854-ACT

NTRK3 codifica o receptor tirosina-quinase Trk C, um receptor de neurotrofinas de alta afinidade que responde principalmente à neurotrofina-3 para regular a diferenciação neuronal, a sobrevivência e a plasticidade sináptica. Após a ligação do ligante, o Trk C ativa a sinalização canônica de receptores tirosina-quinase por meio das vias MAPK/ERK, PI3K/AKT e PLCγ, coordenando programas transcricionais e a remodelação do citoesqueleto. Além das funções no desenvolvimento neural e na manutenção de circuitos, a desregulação da sinalização de NTRK3 e rearranjos do gene têm sido associadas à alteração da sinalização por fatores de crescimento, a defeitos na especificação de linhagem e à ativação de vias oncogênicas em múltiplos contextos tumorais. Essas propriedades tornam o Trk C um ponto útil para estudar a biologia das neurotrofinas, o tráfego do receptor e o crosstalk entre vias que influencia decisões de destino celular.

Trk C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NTRK3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Trk C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NTRK3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NTRK3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Trk C. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NTRK3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Trk C no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Trk C em células tumorais com expressão de NTRK3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.