Trk C CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400854-ACT

NTRK3 kodiert die Rezeptor-Tyrosinkinase Trk C, einen hochaffinen Neurotrophinrezeptor, der vor allem auf Neurotrophin‑3 anspricht und so neuronale Differenzierung, Überleben und synaptische Plastizität reguliert. Nach Ligandenbindung aktiviert Trk C die kanonische Rezeptor-Tyrosinkinase-Signalübertragung über die MAPK/ERK-, PI3K/AKT- und PLCγ‑Signalwege und koordiniert dabei Transkriptionsprogramme sowie den Umbau des Zytoskeletts. Neben seiner Rolle in der neuronalen Entwicklung und der Aufrechterhaltung neuronaler Schaltkreise wurden eine dysregulierte NTRK3-Signalgebung und Genumlagerungen mit veränderter Wachstumsfaktor-Signalübertragung, Defekten der Linienfestlegung und der Aktivierung onkogener Signalwege in verschiedenen Tumorkontexten in Verbindung gebracht. Diese Eigenschaften machen Trk C zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung der Neurotrophinbiologie, des Rezeptortransports und des Crosstalks zwischen Signalwegen, der Zellschicksalsentscheidungen beeinflusst.

Trk C Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NTRK3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Trk C Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NTRK3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NTRK3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Trk C-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NTRK3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Trk C-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Trk C-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NTRK3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.