Plasmide Double Nickase (h) Trk A: sc-400188-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Trk A correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Trk A Double Nickase (h) et le plasmide Trk A Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant NTRK1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Trk A Antibody (Y32Ex): sc-80398
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Trk A | sc-400188-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Trk A | sc-400188-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NTRK1 code pour le récepteur tyrosine kinase humain Trk A, récepteur de haute affinité du facteur de croissance nerveuse (NGF), qui régule la survie neuronale, la différenciation et la croissance axonale. La dimérisation et l’autophosphorylation de Trk A induites par la liaison du ligand activent des voies de signalisation en aval via MAPK/ERK, PI3K/AKT et PLCγ, afin de coordonner des programmes transcriptionnels et des processus dépendants du calcium. Un dysfonctionnement de NTRK1 est associé à des altérations du développement des neurones sensoriels et sympathiques et est impliqué dans des troubles du neurodéveloppement, tandis qu’une signalisation Trk aberrante peut contribuer à l’activation de voies oncogéniques dans des contextes cellulaires pertinents pour la maladie. Par conséquent, NTRK1 est largement étudié en neurobiologie, en transduction du signal et dans des modèles examinant des phénotypes dépendants des facteurs de croissance.
Trk A Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NTRK1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NTRK1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NTRK1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NTRK1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.