TRIP6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423507

Übersicht

Trip6 kodiert TRIP6, ein Adapterprotein mit LIM-Domäne, das an fokalen Adhäsionen und am Aktin-Zytoskelett lokalisiert ist und dadurch Integrin-Signalgebung, Zytoskelett-Remodeling und transkriptionelle Antworten koordiniert. TRIP6 fungiert als Gerüstprotein für Kinasen und Signalkomplexe und verknüpft Signalwege der Rho-Familie von GTPasen sowie den Umsatz fokaler Adhäsionen mit der Regulation von Zelladhäsion, Ausbreitung und Migration. Über Interaktionen mit zytoskelettalen und nukleären Partnern trägt es zur Mechanotransduktion und zur Modulation von Genexpressionsprogrammen bei, die zelluläre Antworten auf Signale aus der extrazellulären Matrix prägen. Eine Fehlregulation TRIP6-assoziierter Netzwerke aus Adhäsion und Motilität ist für die Untersuchung invasiver Phänotypen und von Gewebe-Remodeling-Prozessen in krankheitsrelevanten Modellen von Bedeutung.

Das TRIP6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Trip6-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Trip6-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Trip6 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TRIP6-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Trip6-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TRIP6-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Trip6-Exone abzielen, die für die TRIP6-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Trip6-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TRIP6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom TRIP6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Trip6-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TRIP6 HDR-Plasmid (m) und TRIP6 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Trip6-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Trip6-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.