TRIM44 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-412330

Übersicht

TRIM44 (tripartite motif containing 44) kodiert ein Protein der TRIM-Familie, das an der ubiquitinabhängigen Regulation der Proteinstabilität und der Signalweiterleitung beteiligt ist. Obwohl TRIM44 hinsichtlich seiner Domänenzusammensetzung im Vergleich zu vielen TRIM-E3-Ligasen atypisch ist, wurde es mit der Modulation von Proteostase-Netzwerken und stressresponsiver Signalgebung in Verbindung gebracht und beeinflusst dadurch Prozesse wie Zellwachstum, Überleben und Motilität. Eine dysregulierte TRIM44-Expression wurde in mehreren Tumorarten beschrieben und ist häufig mit einem verstärkt invasiven Phänotyp sowie veränderter Signalwegaktivität assoziiert, darunter PI3K/AKT- und NF-κB-assoziierte Signalwege. Diese Eigenschaften machen TRIM44 zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Untersuchungen der ubiquitinverknüpften Regulation, des Crosstalks zwischen Signalwegen und kontextabhängiger onkogener Signalgebung.

Das TRIM44 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TRIM44-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TRIM44-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TRIM44 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TRIM44-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TRIM44-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TRIM44-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TRIM44-Exone abzielen, die für die TRIM44-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TRIM44-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TRIM44 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom TRIM44 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TRIM44-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TRIM44 HDR-Plasmid (h) und TRIM44 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TRIM44-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TRIM44-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.