TRIM34 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-417920

Übersicht

TRIM34 kodiert eine E3-Ubiquitin-Ligase der TRIM-Familie mit tripartitem Motiv, die an der Regulation der angeborenen Immunität und an der antiviralen Restriktion beteiligt ist. Über seine RING-, B-Box- und Coiled-Coil-Domänen kann TRIM34 ubiquitinabhängige Signalwege und den Proteinumsatz beeinflussen und dadurch Pfade wie interferoninduzierte Antworten und die Signalübertragung von Mustererkennungsrezeptoren (Pattern-Recognition Receptors) mitgestalten. Eine veränderte Aktivität von TRIM-Familienmitgliedern wird häufig mit fehlregulierter Entzündung sowie Wirt–Pathogen-Interaktionen in Verbindung gebracht, was TRIM34 für die Untersuchung von Mechanismen relevant macht, die die Immunhomöostase modulieren. TRIM34 wird zudem in systembiologischen Analysen der Infektionsbiologie und immunassoziierter Krankheitsphänotypen als Kandidatenregulator herangezogen.

Das TRIM34 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TRIM34-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TRIM34-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TRIM34 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TRIM34-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TRIM34-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TRIM34-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TRIM34-Exone abzielen, die für die TRIM34-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TRIM34-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TRIM34 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom TRIM34 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TRIM34-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TRIM34 HDR-Plasmid (h) und TRIM34 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TRIM34-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TRIM34-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.