TRIM10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422691

Übersicht

Das murine TRIM10 (Trim10) kodiert eine E3-Ubiquitin-Ligase mit tripartitem Motiv, die an der ubiquitinabhängigen Kontrolle der Proteinstabilität und am Turnover von Signalkomplexen beteiligt ist. Proteine der TRIM-Familie wirken häufig an der Regulation der angeborenen Immun-Signalübertragung, von Stressantworten sowie von zytoskelettalen oder differenzierungsassoziierten Prozessen mit, indem sie Ubiquitinierung und Proteostase modulieren. In hämatopoetischen Kontexten werden TRIM-Proteine oft mit Programmen der Linienfestlegung und Reifung in Verbindung gebracht, wodurch Trim10 für die Untersuchung erythroid-assoziierter regulatorischer Netzwerke und der breiteren Immunzellbiologie interessant ist. Eine dysregulierte Aktivität des Ubiquitin-Systems ist ein wiederkehrendes Merkmal entzündlicher und hämatologischer Krankheitsmechanismen, was den Einsatz von Trim10-Perturbationen zur Untersuchung von Signalwegabhängigkeiten in relevanten Mausmodellen unterstützt.

Das TRIM10 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Trim10-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Trim10-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Trim10 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TRIM10-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Trim10-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TRIM10-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Trim10-Exone abzielen, die für die TRIM10-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Trim10-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TRIM10 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom TRIM10 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Trim10-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TRIM10 HDR-Plasmid (m) und TRIM10 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Trim10-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Trim10-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.