Triadin Double Nickase Plasmid (m): sc-429407-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Triadin Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Triadin Double-Nickase-Plasmid (m) und Triadin Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Trdn abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Triadin: sc-59724
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Triadin Double Nickase Plasmid (m) | sc-429407-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Triadin Double Nickase Plasmid (m2) | sc-429407-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Trdn kodiert Triadin, ein Membranprotein des junktionalen sarkoplasmatischen Retikulums, das die Erregungs‑Kontraktions‑Kopplung in quergestreifter Muskulatur organisiert, indem es den Ryanodinrezeptor‑Komplex mit luminalen Ca²⁺‑bindenden Proteinen wie Calsequestrin verbindet. In Kardiomyozyten und Skelettmuskelfasern der Maus trägt Triadin dazu bei, die Kinetik der intrazellulären Ca²⁺‑Freisetzung und ‑Wiederaufnahme abzustimmen, die Kontraktionskraft, Refraktärzeit und die Ca²⁺‑Homöostase‑Signalgebung prägen. Über seine Rolle in der Mikrodomänen‑Architektur des sarkoplasmatischen Retikulums beeinflusst Triadin Ca²⁺‑abhängige Signalwege, die die Muskelentwicklung, Stressantworten und die elektrophysiologische Stabilität regulieren. Eine Störung der TRDN‑Funktion ist mit vererbten Arrhythmie‑Phänotypen und myopathischen Merkmalen assoziiert, was Trdn zu einem relevanten Ziel für die Modellierung von Defekten im Ca²⁺‑Handling und des Umbaus des sarkoplasmatischen Retikulums macht.
Triadin Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Trdn-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Trdn abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Trdn-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Trdn-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.