TRH Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423505

Descripción general

Trh codifica la hormona liberadora de tirotropina (TRH), un neuropéptido hipotalámico sintetizado como preprohormona y procesado a TRH bioactiva, que señaliza a través de los receptores de TRH para regular el eje hipotálamo–hipófisis–tiroides. La TRH integra el control neuroendocrino de la liberación hipofisaria de tirotropina e influye en procesos homeostáticos más amplios, como el balance energético, la termorregulación y los circuitos neuroconductuales. En el SNC, las neuronas TRHérgicas interactúan con sistemas de neurotransmisores y vías sensibles al estrés, vinculando la señalización peptídica con la excitabilidad neuronal y la retroalimentación endocrina. La desregulación de la señalización de la TRH se ha asociado con alteraciones de la homeostasis de las hormonas tiroideas y con fenotipos relevantes para trastornos metabólicos y neuroendocrinos, lo que hace de Trh una diana útil para estudios mecanísticos en modelos murinos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TRH (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Trh en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Trh junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Trh tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TRH.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Trh para la investigación de la señalización de TRH, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Trh críticos para la función de TRH
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Trh para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TRH CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido TRH CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Trh. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TRH (m) y el plásmido HDR TRH (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Trh para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Trh definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.