Plasmide Double Nickase (h) TRB-3: sc-401746-NIC

TRIB3 code la pseudokinase tribbles 3 (TRB-3), une protéine régulatrice inductible par le stress qui agit comme protéine d’échafaudage pour moduler la signalisation des kinases plutôt que de catalyser une phosphorylation. TRB-3 est impliquée dans les réponses intégrées au stress et le contrôle du métabolisme via des interactions qui influencent la signalisation d’AKT, l’activité de la voie de l’insuline et les programmes transcriptionnels en aval, et elle peut orienter les décisions cellulaires liées à la survie, à l’apoptose et à l’autophagie. Son expression répond au stress du réticulum endoplasmique et à l’état nutritionnel, ce qui la relie à des voies telles que PI3K–AKT et aux réseaux associés à ATF4/CHOP. Une dérégulation de TRIB3 a été associée dans la littérature à des altérations de l’homéostasie du glucose, à l’inflammation et à des phénotypes de signalisation pertinents pour le cancer, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques des circuits d’adaptation au stress.

TRB-3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TRIB3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TRIB3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TRIB3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TRIB3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.