TRAIL Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-418124
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- TRAIL El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico TRAIL, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: TRAIL Anticuerpo (D-3): sc-8440
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
TRAIL Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-418124 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
TNFSF10 codifica el ligando inductor de apoptosis relacionado con TNF (TRAIL), una citocina transmembrana de tipo II que puede liberarse por proteólisis en forma de ligando soluble. TRAIL se une a receptores de muerte e inicia la apoptosis extrínseca mediante la activación de las caspasas 8/10 dependiente de FADD, con comunicación posterior hacia la amplificación mitocondrial y modulación por las vías de señalización de NF-κB y MAPK. A través de estas vías, TRAIL contribuye a la vigilancia inmunitaria, la regulación de la inflamación y las decisiones de destino celular que influyen en la homeostasis tisular. La desregulación de la señalización de TNFSF10/TRAIL se ha asociado con una sensibilidad alterada a la apoptosis y con fenotipos de evasión inmunitaria observados en diversos contextos de investigación sobre cáncer y enfermedades inflamatorias.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO TRAIL (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TNFSF10 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TNFSF10 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TNFSF10 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TRAIL.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TNFSF10 para la investigación de la señalización de TRAIL, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de TNFSF10 críticos para la función de TRAIL
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TNFSF10 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido TRAIL CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido TRAIL CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TNFSF10. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TRAIL (h) y el plásmido HDR TRAIL (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TNFSF10 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TNFSF10 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.