Plasmide CRISPR d'Activation (h) TRAF6: sc-400117-ACT

TRAF6 (facteur associé au récepteur du TNF 6) est une ligase E3 de l’ubiquitine de type RING et une protéine adaptatrice qui transmet des signaux émis par des membres de la superfamille des récepteurs du TNF ainsi que par les récepteurs de type Toll/IL‑1. Par polyubiquitination liée à K63 de lui‑même et de protéines partenaires, TRAF6 favorise l’activation de TAK1 et, en aval, des voies NF‑κB et MAPK, modulant l’expression des gènes inflammatoires, les réponses immunitaires innées et les programmes de survie cellulaire. TRAF6 s’interface également avec la signalisation PI3K–AKT et contribue à la différenciation des ostéoclastes via la signalisation RANK–RANKL, reliant la régulation immunitaire au remodelage osseux. Une signalisation TRAF6 dérégulée a été associée à l’inflammation chronique, au dysfonctionnement immunitaire et à l’activation de voies oncogéniques dans de multiples contextes tumoraux, ce qui en fait un nœud mécanistique pertinent dans les études axées sur les voies de signalisation.

TRAF6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TRAF6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TRAF6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TRAF6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TRAF6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TRAF6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TRAF6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TRAF6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TRAF6 dans les cellules tumorales présentant une expression de TRAF6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.