TRAC-1 Double Nickase Plasmid (h): sc-409980-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das TRAC-1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- TRAC-1 Double-Nickase-Plasmid (h) und TRAC-1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf RNF125 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
TRAC-1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-409980-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TRAC-1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-409980-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RNF125 kodiert die menschliche E3-Ubiquitin-Ligase TRAC-1, ein RING-Finger-Protein, das über ubiquitinabhängige proteasomale Signalwege dazu beiträgt, den Proteinumsatz und die Signalstärke in Immunzellen zu steuern. TRAC-1 wird mit der Regulation der Signalantworten des T‑Zell-Rezeptors und der Zytokinsignalisierung in Verbindung gebracht, indem es die Stabilität und das Trafficking von Signalkomponenten moduliert und dadurch Aktivierung, Toleranz und nachgelagerte Transkriptionsprogramme mitprägt. Als Teil breiterer Ubiquitinierungsnetzwerke greift RNF125 in regulatorische Schaltkreise der angeborenen und adaptiven Immunität ein, die Entzündungsreaktionen und antigengetriebene Lymphozytenfunktionen beeinflussen. Eine Fehlregulation der RNF125/TRAC‑1‑Aktivität und veränderte Expressionsmuster wurden mit immunvermittelten und entzündlichen Krankheitsmechanismen assoziiert, was RNF125 als Ziel für die Untersuchung von Immunhomöostase und der Umprogrammierung von Signalwegen unterstützt.
TRAC-1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des RNF125-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von RNF125 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die RNF125-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit RNF125-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.