TPX2 Plasmide Double Nickase (h): sc-402581-NIC

TPX2 (fattore di nucleazione dei microtubuli TPX2) è un regolatore dell’assemblaggio del fuso che si localizza ai microtubuli mitotici e promuove la nucleazione e la stabilizzazione dei microtubuli attraverso l’interazione con la chinasi Aurora A e la via RanGTP. Coordinando la formazione dei microtubuli indipendente dai centrosomi, l’organizzazione dei poli del fuso e la segregazione dei cromosomi, TPX2 contribuisce a garantire una progressione mitotica accurata e la stabilità genomica. Un’espressione o una funzione deregolata di TPX2 è associata a difetti mitotici, aneuploidia e fenotipi proliferativi osservati in molteplici contesti tumorali. Queste proprietà rendono TPX2 un nodo frequentemente studiato nel controllo del ciclo cellulare, nella regolazione del checkpoint mitotico e nelle reti di segnalazione del citoscheletro nelle cellule umane.

TPX2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TPX2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TPX2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TPX2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TPX2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.