Plasmide CRISPR/Cas9 KO TPX2 (h): sc-402581

Présentation

TPX2 (« targeting protein for Xklp2 ») code une protéine associée aux microtubules, indispensable à l’assemblage et au maintien du fuseau mitotique, notamment via la nucléation des microtubules autour des chromosomes dépendante de Ran-GTP et l’activation/la localisation de la kinase Aurora A aux pôles du fuseau. TPX2 contribue à l’intégrité du centrosome, à la formation des fibres du kinétochore et à une ségrégation fidèle des chromosomes, ce qui la relie aux voies de progression du cycle cellulaire et de stabilité génomique. Une expression dérégulée de TPX2 est fréquemment associée à des phénotypes prolifératifs et à une instabilité chromosomique dans des contextes liés au cancer, ce qui en fait un marqueur largement utilisé et un nœud mécanistique dans l’étude des voies de signalisation mitotiques. TPX2 humaine est donc pertinente pour étudier la fonction du point de contrôle du fuseau, l’aneuploïdie et les mécanismes de vulnérabilité induits par la mitose dans des modèles de recherche biomédicale.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TPX2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TPX2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TPX2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TPX2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TPX2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TPX2 pour l'étude de la signalisation de TPX2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TPX2 essentiels à la fonction de TPX2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TPX2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TPX2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TPX2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TPX2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TPX2 plasmide HDR (h) et le TPX2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TPX2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TPX2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.