TPPP Lentiviral Activation Particles (h): sc-405957-LAC

Humanes TPPP (tubulin polymerization promoting protein) ist ein mikrotubuli-assoziierter Faktor, der in Oligodendrozyten angereichert ist, die Tubulinassemblierung fördert und Mikrotubuli-Netzwerke stabilisiert, die für Fortsatzbildung und Zellmorphologie erforderlich sind. Durch die Modulation der Zytoskelettdynamik beeinflusst TPPP myelinbezogene Differenzierungsprogramme sowie intrazelluläre Transportprozesse, die von der Organisation der Mikrotubuli abhängen. Eine veränderte TPPP-Expression oder Fehl-Lokalisation wurde mit neurodegenerativer Pathologie in Verbindung gebracht, bei der Zytoskelettstörungen und aberrante Proteinaggregation zentrale zelluläre Merkmale sind. Diese Eigenschaften machen TPPP zu einem geeigneten Knotenpunkt für die Untersuchung der Mikrotubuli-Regulation, der Oligodendrozytenbiologie und von Signalwegen, die einer neuronalen-glialen Dysfunktion zugrunde liegen.

TPPP Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente TPPP-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

TPPP Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der TPPP-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen TPPP-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen TPPP-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.