Partículas Lentivirales de Activación (h) TPCN2: sc-402960-LAC

TPCN2 (canal de dos poros 2) codifica un canal catiónico endolisosomal que regula el flujo iónico intracelular, con funciones destacadas en la señalización de Ca²⁺ dependiente de NAADP desde orgánulos ácidos. Al modular la dinámica endosoma–lisosoma, el tráfico vesicular y la excitabilidad de los orgánulos, TPCN2 influye en procesos posteriores, como la autofagia, los eventos de fusión de membranas y las cascadas de señalización dependientes de Ca²⁺. La variación en la actividad de TPCN2 se ha vinculado con cambios en la biología de la pigmentación y con fenotipos metabólicos, y la desregulación de la señalización endolisosomal que involucra a TPCN2 es relevante en estudios de neurodegeneración y del comportamiento de células cancerosas. Estas características hacen de TPCN2 una diana útil para analizar redes de señalización lisosomal y respuestas celulares reguladas por Ca²⁺ en sistemas modelo humanos.

Las partículas de activación lentiviral TPCN2 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de TPCN2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral TPCN2 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción TPCN2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de TPCN2. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo TPCN2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.